10.3969/j.issn.1004-9398.2004.01.013
常规PCR与RACE结合法快速从cDNA文库中克隆基因
首先根据FE(Ⅱ)-转运蛋白基因家族的保守区设计同源的常规PCR引物(F1,R1),扩增出490bp的特异片段.然后根据RACE法原理,巧妙地设计3′RACE(F2)和5′RACE(R3)特异性引物,使两者既能分别与文库载体上的筛选扩增引物配对扩增cDNA 3′和5′末端序列,又能使扩增出的3′RACE和5′RACE产物序列有重叠部分;另外设计引物时还兼顾到使F2和R3也能配对,从而能对3′RACE和5′RACE扩增产物进行双特异性引物常规PCR鉴定.该方案不但能够直接根据序列鉴定3′RACE和5′RACE产物是否为同一基因序列,还能快捷地用常规PCR鉴定3′RACE和5′RACE扩增产物是否为特异性扩增,避免了对非特异性扩增产物的克隆测序等繁琐的鉴定过程,优化了基因克隆策略.最后根据拼读出的全长序列设计引物(F4,R4)扩增出完整编码区.应用该方法成功地从小金海棠缺铁处理的根系cDNA文库中克隆了 Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因的 cDNA.说明该方案是一种从cDNA文库中克隆目的基因的快捷优化方法.
PCR、RACE、cDNA克隆、cDNA文库、Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因
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Q74(生物小分子的结构和功能)
国家自然科学基金30170552;高等学校优秀青年教师教学科研奖励计划;北京市自然科学基金
2004-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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