10.16138/j.1673-6087.2018.06.007
血栓调节蛋白内皮生长因子样结构域和富含丝氨酸/苏氨酸结构域在大肠埃希菌中的表达
目的:通过构建血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)的内皮生长因子样结构域(D2)、富含丝氨酸/苏氨酸结构域(D3)及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的大肠埃希菌表达体系,以获得TM-D23-GFP融合蛋白.方法:从美国国家生物技术信息中心查询TM的D23结构域、GFP的氨基酸序列,进行密码子优化和全基因合成,利用双酶切法将目标基因插入表达载体PET30a中,转化DE3菌株、诱导表达,通过镍离子-亚胺二乙酸-琼脂糖凝胶树脂(Ni-iminodicitic acid-sefinose resin,Ni-IDA)亲和层析、Q SepharoseTM FF离子交换层析纯化,最终得到TM-D23-GFP融合蛋白.结果:经酶切和测序鉴定证实,TM-D23片段已正确插入PET30a表达载体中;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测结果证实,含His-tag标签的TM-D23-GFP融合蛋白成功表达,且其相对分子质量约为60 000.结论:构建的TM-D23-GFP融合蛋白可在DE3表达菌株中进行表达,为后期融合蛋白的功能研究打下基础.
血栓调节蛋白、绿色荧光蛋白、融合蛋白、大肠埃希菌
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R446.11(诊断学)
上海市卫生计生系统重要薄弱学科建设项目2016ZB0203;上海市卫生和计划生育委员会科研课题项目201540110
2019-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
358-363
