10.3969/j.issn.1673-6087.2013.06.010
构建psiCHECK-2-解耦联蛋白2双荧光素酶报告基因及其荧光素酶活性的分析
目的:构建含解耦联蛋白2(UCP2)-3’非翻译区(UTR)序列的野生型和突变型质粒的双荧光素酶报告基因载体,探讨微小RNA(miR)-15b对UCP2基因表达的调控作用.方法:应用生物信息软件预测miR-15b的靶基因,分别将预测靶基因UCP2的3'UTR及其突变体克隆到荧光素酶载体psiCHECK-2骨架中,构建UCP2野生型和突变型质粒.并采用测序方法鉴定psiCHECK-2-UCP2载体是否构建成功.将UCP2野生型和突变型质粒分别与miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照在293T细胞中共转染.通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-15b对UCP2基因表达的调控作用.结果:测序鉴定证实psiCHECK-2-UCP2双荧光素酶报告基因载体构建成功.双荧光素酶报告基因检测显示转染UCP2野生型和UCP2突变型报告基因的293T细胞过表达miR-15b后,UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显下降,下调31％(P=-0.003),过表达miR-15b抑制剂后,UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显增加,上调46％(P=0.01).而miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照对UCP2突变型的表达均无明显影响(P＞0.05).结论:UCP2是miR-15b直接作用的靶基因,且miR-15b结合于UCP2基因3'UTR区域,转录后水平对UCP2有直接的抑制作用.
解耦联蛋白2、微小RNA-15b、双荧光素酶报告基因
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Q782(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金81270935;上海市科委自然科学基金11ZR1431900;上海市卫生局课题2012-301
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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