10.3969/j.issn.1001-4616.2016.02.013
寡核苷酸介导的重组工程法构建容纳毒性基因ccdB的新型菌株
毒性基因ccdB是最为常用的一种负筛选标记,ccdB基因和R6K复制子一起组成了高效的基因克隆和基因组修饰的遗传操作元件.为获得高转化效率的容纳ccdB基因的菌株,本研究采用重组工程手段,以经优化去除了错配修复的寡核苷酸与pUC骨架、含有ccdB基因的质粒pMK2010共转化,直接对含pir1 16基因型的大肠杆菌DH10B衍生菌株的基因组进行修饰.在筛选的10个菌株中,7个为预期的GyrA462基因型.为消除pMK2010,构建了一个pUC骨架、氨苄青霉素抗性的诱导自剪切质粒pLS2750.pLS2750通过质粒不相容性去除pMK2010后,经诱导I-SceI自剪切而消除.所得菌株LS027的电转化效率为6.9× 108/μg,是对照菌株的约100倍,R6K质粒呈现高拷贝.以LS027为宿主菌的构建了系列克隆载体,以只进行基因克隆可避免载体自连的干扰.新型ccdB基因容纳菌株LS027有着基因操作方面广泛运用的潜力.
ccdB、R6K、寡核苷酸、重组工程
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Q819(生物工程学(生物技术))
国家自然科学基金NSFC81273412
2016-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
66-72
