10.3969/j.issn.1001-4616.2013.03.020
cnksr2基因干扰腺病毒的构建及鉴定
构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据小鼠cnksr2基因序列设计cnksr2干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HinndⅢ位点,PmeI酶切线性化的pShuttle-H1-Sicnksr2干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化E.coli BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用Pac I酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞,包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞病理性变化(Cellpathological effect,CPE),用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为3.98×10 7PFU/mL.cnksr2在大鼠及小鼠中具有保守性,该病毒能在大鼠来源的PC12细胞中成功表达,并且对cnksr2基因干扰效率达50％以上.结论:成功构建了小鼠cnksr2基因的干扰腺病毒载体.
cnksr2基因、干扰、腺病毒
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Q291
国家自然科学基金31171306;江苏省自然科学基金BK2011568
2014-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
103-107
