10.3969/j.issn.2095-1116.2010.01.010
GFP-HPV16 E2及其删除突变体融合蛋白在真核细胞中的表达与定位
目的 构建人乳头瘤病毒16型E2(HPV16 E2)及其N端(TAD)、C端(DBD)删除突变体与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,观察其在Hela细胞中的表达与定位. 方法 HPV16 E2基因经PCR扩增后,与pMD-T载体连接,经蓝白斑筛选、PCR、双酶切鉴定及序列分析后,将E2基因亚克隆至pEGFP-C1真核表达载体中,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2.PCR扩增TAD、DBD基因片段,将其双酶切后插入pEGFP-C1,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD.将3种质粒转染Hela细胞,在荧光显微镜下观察融合蛋白的表达与定位. 结果重组载体经 PCR、双酶切鉴定及测序证明插入片段序列正确,且在Hela细胞中能表达目的 蛋白;GFP-E2融合蛋白在细胞核与细胞质中都有表达,但主要分布于细胞核;而 GFP-DBD融合蛋白仅在细胞核内;GFP-TAD融合蛋白仅在细胞质中. 结论 构建的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2、pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD均在Hela细胞中表达,并确定了各自在细胞内的定位.
HPV16、E2、定位
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R37(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
湖南省科学技术厅计划项目2009FJ3048
2010-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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