内切葡聚糖酶基因的克隆及原核表达
纤维素酶的工业应用一直受成本高、酶活低的限制,而内切葡聚糖酶作为纤维素酶最主要的组成部分,提高内切葡聚糖酶的酶活力显得尤为重要.根据GenBank中收录的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique-faciens)KCTC的模式菌株和解淀粉芽孢杆菌HZ79内切葡聚糖酶序列的相似性及orf分析设计特异性引物,以解淀粉芽孢杆菌的基因组DNA为模板,利用PCR反应克隆出长为1 500 bp的内切葡聚糖酶基因(egl基因),将目的基因与pMD19-T载体相连,转入大肠杆菌DH5α,阳性克隆经菌液PCR及双酶切验证,将验证正确的质粒送金唯智测序公司测序.比对结果表明:该克隆片段无碱基缺失,无移码突变,扩增序列准确、可靠.将测序正确的重组质粒转化BL21,进行大肠杆菌BL21(DE3)的原核表达,SDS-PAGE分析蛋白的大小为55 ku,等电点为8.12.为后续的内切葡聚糖酶基因突变体文库的建立,及egl酶酶活力及耐受性提高菌株的高通量筛选奠定前期基础.
解淀粉芽孢杆菌、内切葡聚糖酶基因、原核表达
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Q786(基因工程（遗传工程）)
吉林省高等学校秸秆综合利用高端科技创新平台[吉高平合字2014C-1],吉林省教育厅项目2016176
2017-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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