罗非鱼2种常见病毒双重RT-PCR检测方法的建立
根据罗湖病毒(Tilapia lake virus,TiLV)编码RNA聚合酶片段1和病毒性神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)编码衣壳蛋白的基因片段,设计2组特异性引物,建立同时检测TiLV和NNV的双重RT-PCR(duplex reverse transcription polymerase chain reaction,dRT-PCR)检测方法,并对建立的方法进行反应体系和条件优化.结果表明:dRT-PCR方法的25μL优化反应体系为2 × One-Step Reaction Solution B 12.5μL,One-Step Enzyme Mix 1 μL,NNV F(20 μmol/L)0.5 μL,NNV R(20 μmol/L)0.5μL,TiLV F(20 μmol/L)0.5 μL,TiLV R(20 μmol/L)0.5 μL,模板1为 0.5 μL,模板2为 0.5 μL,补充RNase-free water至总体积25μL.优化反应条件为50 ℃ 30 min,94 ℃ 2 min;94 ℃ 30 s,56 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,30 个循环;72 ℃延伸 5 min.灵敏度均为1×10-5 ng/μL,特异性好.该方法可同时检测罗非鱼2种常见病毒TiLV和NNV,也可单独检测TiLV或NNV,为TiLV、NNV的监测和预防提供技术支撑.
罗湖病毒、病毒性神经坏死病毒、特异性引物、dRT-PCR
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S943(水产保护学)
福建省引导性项目2019N0030
2023-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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