10.11855/j.issn.0577-7402.2023.01.0034
YAP对高糖培养大鼠心脏成纤维细胞活化作用的影响及其机制
目的 探究Yes相关蛋白(YAP)对高糖诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖和转分化的影响及其作用机制.方法 分离培养1～3日龄SD大鼠CFs,用40.0 mmol/L葡萄糖诱导CFs,构建糖尿病心肌病(DCM)细胞模型,24 h后检测细胞YAP、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达水平.取原代大鼠CFs,分别设置正常糖(5.5 mmol/L D-Glucose,NG)组、高糖(40.0 mmol/L D-Glucose,HG)组、NG+维替泊芬(NG+VP)组、HG+VP组.VP为YAP抑制剂,剂量为0.5μmol/L.各组处理CFs 24 h后,采用波形蛋白免疫荧光法鉴定CFs,Ki-67免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况,Western blotting检测各组YAP、α-SMA、collagenⅠ、collagenⅢ、CTGF蛋白表达水平.结果 免疫荧光法鉴定波形蛋白阳性,提示原代培养的细胞为大鼠CFs.Ki-67免疫荧光检测结果显示,与NG组比较,HG组CFs的Ki-67阳性率(％)明显升高(67.33±5.14 vs.22.94±4.88,P<0.05);YAP抑制剂VP处理后,CFs的Ki-67阳性率(％)降低(46.83±3.86 vs.67.33±5.14,P<0.05).Western blotting检测结果显示,与NG组比较,HG组高糖干预24 h后,CFs中α-SMA、collagenⅠ、collagenⅢ的相对表达水平均明显升高(1.43±0.98 vs.0.93±0.06,1.80±0.09 vs.1.08±0.09,1.43±0.09 vs.0.88±0.10,P<0.05),YAP和CTGF蛋白相对表达水平也升高(1.93±0.15 vs.1.17±0.09,1.80±0.18 vs.1.23±0.16,P<0.05);与HG组比较,HG+VP组的α-SMA、collagen I、collagenⅢ、CTGF蛋白相对表达水平均明显降低(1.27±0.06 vs.1.71±0.12,2.05±0.23 vs.3.03±0.17,1.10±0.12 vs.1.82±0.18,1.31±0.16 vs.1.57±0.03,P<0.05);与NG组比较,HG+VP组中α-SMA、collagenⅠ、CTGF蛋白相对表达水平均较高(P<0.05).结论 高糖可刺激SD大鼠乳鼠CFs增殖及活化,合成过多的胶原蛋白等细胞外基质,其作用机制可能与YAP/TEAD/CTGF传导通路有关.
Yes相关蛋白、糖尿病心肌病、心脏成纤维细胞、心肌成纤维细胞
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R587.2;R542.2(内分泌腺疾病及代谢病)
国家自然科学基金81800338
2023-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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