10.11855/j.issn.0577-7402.2021.12.04
lncRNA NEAT1激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的影响及机制
目的 探讨lncRNA NEAT1通过激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)模型细胞凋亡的影响及可能机制.方法 以0、5、10、20μmol/L Aβ25-35诱导PC12细胞,构建AD细胞模型.用5μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,并于24、48、72 h采用qRT-PCR检测lncRNA NEAT1相对表达水平.取PC12细胞,(1)设置对照组、敲降lncRNA NEAT1组、si-NC组、空载体组及过表达lncRNA NEAT1组,对照组不做任何处理,其余4组分别用含si-lncRNA NEAT1、si-NC、pcDNA3.1-NC、pcDNA3.1-lncRNA NEAT1的Opti-MEM培养基培养并转染8 h,然后使用20μmol/L Aβ25-35处理.采用qRT-PCR检测lncRNA NEAT1相对表达水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况,并以G1和G2期细胞比例反映细胞增殖情况;ELISA法检测细胞上清中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.(2)设置对照组、空载体组及过表达lncRNA NEAT1组,采用Western blotting检测p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平.(3)设置对照组、si-NC组、敲降lncRNA NEAT1组、空载体组、过表达lncRNA NEAT1组及过表达lncRNA NEAT1+LY294002组,过表达lncRNA NEAT1+LY294002组细胞转染pcDNA3.1-lncRNA NEAT1后,加入10μmol/L PI3K通路抑制剂LY294002处理,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 不同浓度的Aβ25-35均可明显抑制lncRNA NEAT1的表达,且呈浓度依赖性(P=0.001).与空载体组相比,过表达lncRNA NEAT1组lncRNA NEAT1相对表达水平、细胞增殖率、G2期细胞比例明显增高,细胞凋亡率、G1期细胞比例明显降低(P<0.05);与si-NC组相比,敲降lncRNA NEAT1组lncRNA NEAT1相对表达水平、细胞增殖率、G2期细胞比例明显降低,细胞凋亡率、G1期细胞比例明显升高(P<0.05).ELISA检测结果显示,与空载体组相比,过表达lncRNA NEAT1组细胞上清中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平明显降低(P<0.05);与si-NC组相比,敲降lncRNA NEAT1组细胞上清中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平明显升高(P<0.05).Western blotting检测结果显示,与空载体组相比,过表达lncRNA NEAT1组信号通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt相对表达水平增高(p-PI3K:0.86±0.05 vs.0.15±0.02,P=0.003;p-Akt:0.86±0.06 vs.0.11±0.04,P=0.000).与过表达lncRNA NEAT1组相比,过表达lncRNA NEAT1+LY294002组细胞凋亡率明显升高(9.00％±0.10％vs.5.13％±0.21％,P=0.004).结论 lncRNA NEAT1可通过调控PI3K/Akt通路促进Aβ25-35诱导的PC12细胞增殖,抑制PC12细胞凋亡.
阿尔茨海默病;长链非编码RNA;核富集转录本1;PI3K/Akt
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R74(神经病学与精神病学)
济宁医学院教师科研扶持基金JYFC2019FKJ032
2022-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
1188-1195
