10.11855/j.issn.0577-7402.2019.12.05
鞘氨醇激酶-1对热联合内毒素打击小鼠肺微血管内皮细胞通透性的影响
目的 探讨鞘氨醇激酶-1(SphK1)对热联合内毒素(LPS)打击小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)通透性的影响.方法 分离培养并鉴定PMVECs,建立热联合LPS双重打击PMVECs模型.将PMVECs细胞分为对照组、热打击组(HS组)、内毒素打击组(LPS组)及热联合内毒素打击组(HS+LPS组),采用Western blotting检测各组细胞2种鞘氨醇激酶亚型(SphK1/2)、3种1-磷酸鞘氨醇膜受体(S1PR1/2/3),以及相关紧密连接蛋白如闭合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达,荧光定量PCR检测SphK及S1PR mRNA的表达.将细胞分为对照组、HS+LPS组及DMS预处理热联合内毒素打击组(HS+LPS+DMS组),采用SphK活性检测试剂盒检测酶活性,CCK-8试剂盒检测细胞活力,EVOM跨膜电阻测量仪检测细胞跨上皮电阻(TEER),并观察特异性抑制SphK1表达对细胞活力和通透性的影响.结果 热联合内毒素打击后,细胞SphK1和S1PR3蛋白、mRNA表达及酶活性水平与正常对照组比较明显上升(P<0.01),细胞活力、TEER值、紧密连接蛋白(ZO-1、occludin)表达较对照组下降;采用SphK1特异性抑制剂DMS预处理PMVECs细胞后,明显提升了细胞活力[63.3％±7.1％vs.41.3％±4.5％,P<0.05]、TEER值[(154.3±16.0)(Ω·cm2)vs.(84.7±9.6)(Ω·cm2)],以及紧密连接蛋白的表达(P<0.05).结论 SphK1的激活可以促进热联合LPS打击小鼠PMVECs通透性的增加,主要参与的下游1-磷酸鞘氨醇(S1P)细胞膜表面受体可能为S1PR3,特异性抑制SphK1表达可减轻PMVECs损伤.
重症中暑、肺损伤、SphK1、通透性
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R594.12(全身性疾病)
军事医学创新工程专项;广东省自然科学基金
2020-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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