10.3321/j.issn:0577-7402.2008.04.036
包装菌株XL-pⅢ的构建及缺陷型辅助噬菌体的制备
目的 构建能用来制备基因Ⅲ缺失的辅助噬菌体的包装菌株.方法 采用重叠延伸PCR方法将完整的噬菌体基因Ⅲ和氯霉素抗性基因体外拼接起来,利用λRed重组系统将其整合到E.coli XL1-Blue染色体上的组氨酸操纵元位点构建包装菌株,用氯霉素抗性进行筛选,并用PCR及组氨酸表型鉴定;用PCR法构建功能基因Ⅲ缺失的噬菌体基因组,将其转化到包装菌株中培养制备辅助噬菌体,以集落形成来测定滴度.结果 重组菌株能在氯霉素抗性平板上生长,PCR扩增可得到目的片段,组氨酸表型缺失,说明靶基因定向重组到了细菌染色体的靶位点,将重组包装菌株命名为XL-pⅢ,以其制备的缺陷噬菌体滴度可达到3.7×10s,只具备一次感染力.结论 成功构建包装菌株,并能制备辅助噬菌体,有望用于选择感染性噬菌体(SIP)体系.
DNA、重组、噬菌体
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R34(人体生物化学、分子生物学)
国家自然科学基金30200156
2008-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共3页
470-472
