10.3321/j.issn:0577-7402.2006.03.017
小鼠AMCase基因突变体的cDNA克隆及序列分析
目的克隆小鼠酸性哺乳动物几丁质酶(AMCase),并进行序列分析.方法从BALB/c小鼠胃组织中提取总RNA,逆转录成cDNA,运用PCR技术体外扩增获得AMCase基因,构建pMD18-T/AMCase重组载体,测序后应用DNAMAN 4.0软件与标准序列进行比较,并通过SignalP 3.0和TMHMM Server v.2.0等服务器对等电点、氨基酸组成、信号肽和跨膜结构等特征进行分析.结果所克隆基因共编码473个氨基酸,分子量为51.93kD,等电点为4.73,与AMCase同源性达99.57%,同属18家族的几丁质酶成员,由信号肽(氨基酸1～21)、催化区(氨基酸22～391)、铰链区(氨基酸392～425)和结合区(氨基酸426～473)组成.编码的蛋白质在催化区和铰链区分别发生了突变,292位氨基酸由Ala(丙氨酸)突变为Pro(脯氨酸),404位氨基酸由Thr(苏氨酸)突变为Ser(丝氨酸).结论所克隆的基因为AMCase的一个突变体,其相关生物学信息的明确,为今后运用分子生物学技术进一步深入研究其作用奠定了基础.
酸性哺乳动物几丁质酶、突变体、序列分析、DNA
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Q781(基因工程（遗传工程）)
军队科研项目04A
2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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