10.3321/j.issn:0577-7402.2001.08.029
用原位逆转录PCR两种扩增系统检测HCV RNA 的对比研究
@@ 原位PCR(IS-PCR)技术是能在组织切片或细胞涂片上原位对特定的DNA或RNA进行扩增的一种新技术,是PCR和原位杂交两种技术相结合的产物.与原位杂交相比,由于先对待测基因片段进行扩增,因而具有更高的灵敏度,可以检测出原位杂交所检不出的单拷贝、低拷贝(20bp)基因,能将敏感性提高50～100倍,同时又具有原位杂交良好的定位能力.间接法IS-PCR是目前应用最广泛的靶序
列原位扩增技术,其所用引物和dNTP都不带标志,扩增结束后,再用原位杂交技术检测特异性扩增产物.与直接法相比较,虽然操作复杂,但是扩增效率高,更重要的是特异性强,假阳性率低,这是因为原位杂交所用的探针可特异性地检出扩增产物中的靶序列,这样,即使扩增产物中有非靶序列成分,也不会呈阳性反应,因而提高了原位PCR的特异性.原位逆转录PCR(IS-RT-PCR)是结合逆转录反应和PCR扩增检测细胞内低拷贝mRNA的方法.以mRNA为模板,在逆转录酶催化下合成cDNA,再以cDNA为模板,用PCR对靶序列进行扩增,然后进行IS-PCR检测RNA常用方法,并已成功用于检测丙型肝炎组织的HCV RNA.由于丙型肝炎是RNA病毒,不能直接进行PCR扩增,需经逆转录成cDNA方可扩增,称之为原位逆转录PCR.目前常用的逆转录酶有两种:禽类成髓细胞性白血病病毒(AMV)和莫罗尼鼠类白血病病毒(MMLV),在实际工作中发现两种酶系统存在着较大的差异,故此,对两种系统的酶用不同浓度在原位PCR中的HCV RNA逆转录扩增的灵敏度进行研究与探索.
逆转录扩增系统、原位逆转录PCR、肝炎病毒、丙型
26
R575(消化系及腹部疾病)
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共2页
621
