10.3321/j.issn:0577-7402.2001.07.004
HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及对HBeAg表达的影响
采用分子生物学方法，设计引入KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增HBV 的Pre-C/C片段（1814～2452），经酶切后连于EBO真核表达载体，利用定点突变技术分别对连接载体进行T1862，A1896，A1899，A1896+A1899点的定点诱变。经错配PCR-RFLP和测序分析，确定突变的克隆。将突变前后的质粒以脂质体转染法转染HepG2细胞，检测不同点突变后HBeAg表达的改变。突变前后的质粒转染HepG2细胞经稳定表达，结果未突变的EBO-PreC/C重组质粒HBeAg表达为强阳性，A1899突变的重组质粒HBeAg表达比未突变的重组质粒稍弱，而转染EBO空载体和T1862，A1896，A1896+A1899重组质粒突变体的细胞培养上清HBeAg均为阴性。上述突变体的构建将为体外研究前C信号肽区热点变异对HBeAg在细胞中表达及对肝炎病毒基因组复制的影响奠定基础。
定点突变、真核表达载体、转染
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R512.62(传染病)
国家自然科学基金396302080;军队重点项目96Z024
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共3页
480-482
