10.16085/j.issn.1000-6613.2017-1428
海藻糖合酶的自诱导表达及其催化生产海藻糖的新工艺
海藻糖合成酶一步合成法是制备海藻糖最具工业化前景的方法之一.在前期研究基础上,本研究从发酵产酶和酶催化两方面进一步降低海藻糖生产成本,提高生产效率.首先,采用自诱导表达系统,在摇瓶体系中对含有海藻糖合成酶的大肠杆菌 BL21(DE3)进行三阶段温度控制发酵,即以自诱导培养基发酵培养重组大肠杆菌,在37℃培养2.5h,25℃培养10.5h,30℃继续培养至发酵终点;此时,酶活达到1.42×104U/mL,比自诱导恒温提高了57.4%.在此基础上,在5L反应器上进行三阶段温控发酵验证实验.通过连续发酵40h后OD达到31,细胞干重浓度达到15.32g/L,酶活达到最高值1.81×104U/mL,比摇瓶发酵提高了28.6%.其次,开展全细胞催化生产海藻糖工艺优化,以5%甲苯处理45min的大肠杆菌细胞为研究对象,考察了 pH、反应温度、底物浓度对全细胞催化合成海藻糖的影响以及全细胞催化的重复使用性能.结果发现:催化反应在pH为7.5、温度为30℃、麦芽糖初始浓度为350g/L时,海藻糖的得率达到74%以上;全细胞催化反应10个批次后,细胞仍保持对麦芽糖64.1%的转化率.本研究为海藻糖的工业化生产提供了一种经济、高效的工艺路线.
海藻糖、海藻糖合酶、自诱导表达、三阶段温控、全细胞催化
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TQ464.1
国家自然科学基金联合基金U1603112;生命有机化学国家重点实验室开放课题SKLBNPC15429;国家重点研发计划2017YFC1600404;江苏省环保厅项目2016053;江苏省十二批六大人才高峰2015-JY-009;江苏省先进生物制造创新中心项目
2018-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1949-1955
