10.16085/j.issn.1000-6613.2016.01.028
丁酸梭杆菌VPI 3266甘油脱水酶和1,3-丙二醇氧化还原酶的克隆、表达
对丁酸梭杆菌VPI 3266的1,3-丙二醇代谢途径关键酶甘油脱水酶（DhaB）与1,3-丙二醇氧化还原酶（DhaT）进行了研究。甘油脱水酶基因dhaB全长3315bp，编码两个蛋白亚基，分别为甘油脱水酶的核心酶和脱水酶的再激活酶。前者全长2367bp，编码788个氨基酸，后者全长918bp，编码305个氨基酸。通过构建重组质粒，使其在大肠杆菌中实现了活性表达。1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT全长1166bp，编码388个氨基酸，属于NADP依赖的离子激活的醇脱氢酶家族III。通过IPTG诱导，在大肠杆菌中实现了高效表达，酶活达到5.2U/mL。并通过Ni亲和柱获得了电泳纯的蛋白。蛋白相对分子质量为4.19×104。该酶的最适反应温度为50℃，最适反应pH值为10.0，在pH值8.5～10.0范围内比较稳定，在45℃保温2h，酶活还残存50%。该酶以1,3-丙二醇为底物，在生理条件下的Vmax和Km分别为29.2U/mg 和19.8mmol/L。
丁酸梭杆菌、甘油脱水酶、1、3-丙二醇氧化还原酶、重组表达
Q814(生物工程学(生物技术))
国家自然科学青年基金30900008;江苏省自然科学基金BK20131423;江苏省优势学科建设工程项目PAPD。
2016-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
210-215
