10.3969/j.issn.1673-6583.2014.04.017
靶向人 BRG1基因的慢病毒载体构建及效率验证
目的：构建靶向人 BRG1基因的短发夹 RNA（shRNA）慢病毒载体并验证其沉默效率。方法：设计3个针对人 BRG1基因的特异性 shRNA 序列（shBRG1），构建于 pLKO．1慢病毒载体中，并与 psPAX2和 pMD2．G 质粒共同转染293T 细胞以包装成慢病毒颗粒。将包装好的慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞（HASMC），应用实时荧光定量 PCR 和 western blot 检测 BRG1 mRNA 和蛋白表达水平，判断其沉默效率。结果：3种 shBRG1干扰序列均成功插入慢病毒载体中且测序正确，3种慢病毒均可有效降低 BRG1 mRNA 表达水平（P 均＜0．01）。其中 shBRG1-3的沉默效率最高，其感染HASMC 后 BRG1蛋白表达水平较对照组显著下降（P ＜0．01）。结论：靶向人 BRG1基因的 shRNA 慢病毒表达载体构建成功，shBRG1-3慢病毒能够有效降低 BRG1 mRNA和蛋白表达水平。
BRG1、短发夹 RNA、慢病毒载体、主动脉平滑肌细胞
S85;R37
国家自然科学基金81300233；上海市科委基础研究重点项目12JC1408102
2014-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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