10.3321/j.issn:1002-0470.2004.09.007
甘薯β-淀粉酶cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达
利用RT-PCR技术从甘薯新大紫(Ipomoea batatas Lam cv. Xindazi)块根总RNA中扩增出预期大小的DNA片段(约1.5kb).将该片段克隆至pMD-T载体,经酶切分析和序列测定后,正向插入的重组子命名为pMD-cAmy,插入片段长1521bp,编码499个氨基酸残基的多肽,分子量55 998kD.克隆的β-淀粉酶cDNA与报道的甘薯另一品种Kokei No.14的mRNA 有99%的序列相同,与Calystegia sepium β-淀粉酶mRNA有87%相同.重组子pMD-cAmy经I PTG诱导后,胞内可溶性提取物经凝胶电泳和活性染色,出现明显的淀粉酶活性带.SDS-PAGE表明,大肠杆菌表达的β-淀粉酶亚基的分子量约为50kD.重组子pMD-cAmy在淀粉平板上形成明显的水解圈,说明甘薯β-淀粉酶cDNA不仅能在大肠杆菌表达,而且能将有活性的β- 淀粉酶分泌到胞外.对重组子pMD-cAmy和甘薯块根可溶性提取物的比较发现,大肠杆菌表达的β -淀粉酶与甘薯块根的β-淀粉酶除迁移率不同外,对淀粉酶活性抑制剂EDTA和β-巯基乙醇的敏感性相同.
甘薯、β-淀粉酶、cDNA克隆、表达
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S51;R39
国家高技术研究发展计划863计划2001AA214181;四川农业生物技术攻关项目H02003062;四川大学校科研和教改项目H02003062
2004-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
29-33
