粉葛查尔酮合成酶基因PtCHS的克隆与植物表达载体构建
查尔酮是植物体形成的一类次级代谢产物,在植物花色形成、育性及抵抗胁迫中发挥重要作用.前期研究发现粉葛与野葛中总黄酮的含量和葛根素的含量差异较大,而查尔酮合成酶是黄酮类化合物合成中的首个关键酶.为了研究野葛与粉葛中的查尔酮合成酶(CHS)基因是否存在差异性,利用同源克隆的方法,根据已报道的野葛(CHS基因序列设计引物,从粉葛中克隆CHS基因,对其进行蛋白相对分子质量、二级结构及亚细胞定位预测等生物信息学分析并构建植物表达载体.结果显示,成功克隆到粉葛CHS基因,将其命名为PtCHS,该基因cDNA序列长1187 bp,包含一个长1 179 bp完整的ORF框,推导编码389个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为42.8kD,理论等电点为5.96,无跨膜结构域,为稳定的亲水性蛋白,二级结构主要由a-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,同时亚细胞定位预测结果显示蛋白位于细胞质;氨基酸序列多重比对发现,粉葛的查尔酮合成酶基因(PtCHS)所编码的氨基酸与已报道的野葛CHS基因编码的氨基酸同源性为100％,与大豆、赤豆、菜豆及木豆的氨基酸同源性均在95％以上;蛋白互作预测分析得出,CHS与CHI、C4H及REDUCTASE发生互作的可能性较大;用PtCHS与植物表达载体pBI121构建重组子pBI121-PtCHS,为葛根查尔酮合成酶基因的功能验证提供重要的参考依据.
粉葛(Pueraria montana var.thomsonii)、查尔酮合成酶、PtCHS、表达载体
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本研究由广西薯类首席专家创新团队基金;南宁市重点研发计划项目;广西科学研究、技术开发计划项目
2021-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
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