利用CRISPR/Cas9系统定向编辑甘蓝型油菜BnaLCR78基因
分泌信号肽是生物体内的一类重要功能分子.通过生物信息学分析,揭示甘蓝型油菜BnaLCR78基因编码一个由78个氨基酸组成、N端包含分泌信号肽且C端富含半胱氨酸的蛋白,属于富含半胱氨酸的分泌信号肽.为进一步研究该基因的功能,借助农杆菌介导的甘蓝型油菜下胚轴遗传转化方法,利用CRISPR/Cas9系统对甘蓝型油菜BnaLCR78基因进行编辑,实现定向敲除.本实验共计使用1 200个外植体,经除草剂草铵膦的抗性筛选及对213株抗性苗基因组DNA的PCR检测,获得了26株转基因油菜,转化率约为2.17％,但在T0代并未获得发生了目标基因被编辑的植株.幸运地是从T0自交获得的T1植株中获得基因被编辑了的植株.通过扩增T1代27株转基因油菜靶位点并测序,发现有1株在靶位点2有一个T碱基的插入,其基因型为+1/WT的杂合突变体,说明在T1植株中,基因的编辑效率达到了3.7％.这对后续研究甘蓝型油菜BnaLCR78基因功能的研究提供了帮助.
甘蓝型油菜、分泌信号肽、BnaLCR78基因、生物信息学、基因编辑
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TH761.1;S634.3;S565.4
国家自然科学基金31571707
2019-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
6673-6679
