巴西橡胶树地上部地下部均一化酵母双杂交cDNA文库构建及评价
缺磷是影响橡胶树产量的主要因素之一,蛋白泛素化在其中发挥了重要作用.为研究泛素化在橡胶树低磷胁迫中的调控作用,本研究分别以巴西橡胶树“热研7-33-97”组培苗地上部和地下部为材料,构建酵母双杂交文库,并对其进行了评价.首先用CTAB法大量提取橡胶树地上部和地下部总RNA,再用PROMEGA试剂盒处理获得纯化的mRNA,然后采用SMART(R)技术和LD-PCR合成双链cDNA(ds-cDNA),继而通过双链特异性核酸酶(DSN)对ds-cDNA进行均一化处理,再经CHROMA SPIN+TE-400柱子纯化长片段的cDNA,最后将获得的长片段cDNA和线性化载体pGADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞,构建均一化酵母双杂交文库.结果显示:地上部文库滴度8×107 cfu/mL,插入片段≥0.5kb的重组率为100％;地下部文库滴度7× 107 cfu/mL,插入片段≥0.5 kb的重组率为87％.该结果表明文库已成功构建,可以用于进一步实验.
巴西橡胶树、地上部和地下部、酵母双杂交cDNA文库、均一化
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S852.723;S511;Q966
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项重点项目1630022014003
2017-04-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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