10.3969/j.issn.1004-4957.2018.11.005
基于Endo-M N175Q糖链转移反应与丙酮富集糖肽的LC-MS分析糖蛋白N-糖链
基于化学酶标记和丙酮富集糖肽方法,建立了一种可靠、有效、简单的糖蛋白N-糖链分析方法.以唾液酸糖肽(SGP)为模型糖肽,比较了样品中丙酮加入量对SGP的富集效果,最终选择加入样品体积5倍量的丙酮.用丙酮富集经胰蛋白处理的核糖核酸酶B(RNase B)酶解液中的糖肽,以富集分离得到的糖肽(糖基供体)和PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc(糖基受体)作为酶反应底物,进行Endo-M N175Q的转糖基反应,得到PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc-N-糖链标记物.采用YMC C18色谱柱为分析柱,10 mmol/L甲酸铵-乙腈为流动相梯度洗脱,经液相色谱-串联质谱(LC-MS)检测得到5种高甘露糖型糖链.结果表明,丙酮可有效地富集大量肽和少量糖肽混合溶液中的糖肽,Endo-M N175Q可将天然糖肽的糖链转移到PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc受体上.将该方法应用于胎球蛋白N-糖链分析,检测到5种复杂型N-糖链.该研究为各种糖蛋白N-糖链检测提供了新的分析方法.
糖蛋白、N-糖链、酶标记、液相色谱-质谱(LC-MS)
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O657.63;O629.73(分析化学)
国家自然科学基金资助项目21365022,21565027
2018-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
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