10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.10.08
表达单纯疱疹病毒受体HVEM的黑色素瘤B16-ova-HVEM细胞系的构建及成瘤后oHSV2治疗效果初探
目的：构建可被单纯疱疹病毒感染的新型细胞系B16-ova-HVEM，体外验证目的基因的表达并初步探究其成瘤后，应用Ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒（oHSV2）的治疗效果。方法构建表达单纯疱疹病毒受体（HVEM）的质粒载体，脂质体转染B16-ova细胞，嘌呤霉素筛选表达HVEM的阳性克隆。体外验证后进行体内检测，B16-ova-HVEM荷瘤C57BL/6小鼠，成瘤后分为两组，每组5只小鼠，给予oHSV2治疗为oHSV2治疗组，荷瘤未治疗的小鼠为对照组。治疗后测量肿瘤大小，观察小鼠生存期；流式细胞术检测两组小鼠外周血中CD4+、CD8+T细胞和髓系来源的抑制性细胞（MDSC）比例变化。结果质粒DNA测序和酶切鉴定结果均显示成功构建含HVEM的质粒；荧光显微镜下可观察到筛选后细胞发绿色荧光；流式细胞术检测筛选后细胞GFP阳性率为98.3%；RT-PCR验证结果显示筛选后细胞含有目的基因HVEM；oHSV2在感染复数（MOI）为0.1、0.5和1的情况下均能明显感染筛选出的细胞；动物实验显示，oHSV2体内治疗后抑瘤效果显著（P﹤0.001）；流式检测结果显示oHSV2治疗后小鼠外周血中CD4+、CD8+T细胞比例明显高于对照组（P﹤0.01），而MDSC比例明显低于对照组（P﹤0.01）。结论成功构建B16-ova-HVEM细胞系，其既可被OT-1小鼠T细胞特异性识别又可被单纯疱疹病毒感染，为肿瘤特异性免疫治疗和溶瘤病毒联合治疗的研究奠定基础。
HVEM、B16-ova、oHSV2
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R739.5(肿瘤学)
高等学校全国优秀博士学位论文作者专项基金2007B68
2016-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
962-965,969
